中国饲料添加剂信息网
  • 搅拌调整对L- 色氨酸发酵的影响
    添加时间:18-01-03 09:35:39作者:来源:点击数:
     
    分享到:微信 更多
    Effect of Adjusting Agitation on L-Tryptophan Fermentation
    宋 乐1,2,夏爱坤1,徐 鲁1,李继安1,林惠敏1*
    (1. 中国医药工业研究总院上海医药工业研究院,创新药物与制药工艺国家重点实验室,上海 201203;
    2. 中国药科大学,江苏南京 211198)

     
    关键词:搅拌;溶氧;质粒;L-色氨酸
     
    以下为文章节选
    L- 色氨酸( 1) 是人体必需氨基酸之一,对人和动物的生长发育、新陈代谢起着重要作用,广泛应用于医药、食品和饲料等领域[1]。1 的制备主要有酶法、生物合成法及微生物直接发酵法。近年来,随着基因工程技术的发展,采用大肠埃希菌(Escherichia coli) 高密度发酵大规模生产1 成为主要的生产方式。2002 年Dodge 等将质粒pBE7 转化至tnaA 和serA 基因失活的抗邻氨基苯甲酸的突变宿主菌中[2],不添加任何前体物,1 产量达到42 g/L。于传军等以大肠埃希菌W3110 为出发菌[3],采用tac 启动子突变体串联基因组上表达trpEfbrDCBA基因,同时失活或敲除大肠埃希菌W3110 中的tnaA、trpR 和tyrR 基因,突变tyrA 和pheA 基因,并向改造后的菌株中转入含有串联表达来源于大肠埃希菌K12,筛选出高产菌株,发酵35 h,1 产量45.5 g/L。
     
    基因工程菌对发酵条件要求更高,发酵液中的溶氧浓度会影响大肠埃希菌的代谢途径,副产物乙酸的积累会抑制菌体的生长和发酵后期1 的产量[4—5]。不同的溶氧浓度影响菌体的生长速率,改变菌体的代谢途径,同时影响基因工程菌的质粒稳定性[6],进而对1 产量有较大影响。发酵罐上,搅拌和通气比决定了发酵液的溶氧水平,本研究主要从搅拌浆的搅拌转速和搅拌桨尺寸调整来考察溶氧对1 发酵的影响。
     
    1 仪器与材料
    1.1 仪器与试剂
    2 方法与结果
    2.1 分析方法
    样品预处理:取发酵液5 ml,加水稀释至发酵液中1 浓度低于20 g/L,混匀后于60 ℃水浴加热30 min,使发酵液中析出的1 晶体完全溶解。取水浴后的发酵液1 ml 置10 ml 离心管中,加入甲醇8 ml,混匀后超声(250 W、40 kHz)15 min,精密取出1 ml 离心(13 000×g)5 min,取上清液进行HPLC 检测,将所测得1 浓度乘以相应稀释倍数即为发酵液单位。
    发酵单位测定:HPLC 法[7]。色谱柱 C18 柱(4.6 mm×250 mm,5 µm) ;流动相 2.2 mmol/L 磷酸二氢钾水溶液∶甲醇(80 ∶ 20) ;流速 1.0 ml/min ;柱温 40 ℃ ;检测波长 278 nm ;进样量 2 µl。
    乙酸的测定:HPLC 法[8]。色谱柱 Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 µm) ;流动相 36.7 mmol/L磷酸二氢钾水溶液( 用85%磷酸调至pH 2.7) ∶乙腈(96 ∶ 4) ;流速 0.8 ml/min ;柱温 45 ℃ ;检测波长 210 nm ;进样量 2.5 µl。
    菌丝形态检查:美蓝染色法,光学显微镜观察。
    游离氨基氮的检测:甲醛氧化测定法。
    还原糖的检测:生物传感仪测定。
    质粒丢失率的测定[9] :无菌条件下取不同发酵时间的发酵液l ml,用无菌水逐级稀释,分别取10-6、10-7 和10-8 3 个梯度的稀释液0.15 ml,涂布于非选择性固体培养基平板上,37 ℃倒置培养24 h ;随机挑取在非选择性培养基上生长的菌落200 ~ 300 个,分别点种在对应的选择性培养基和非选择性培养基平板上,37 ℃倒置培养24 h,观察2 种平板中菌体的生长情况,计算平板上生长的菌数比例。由于缺失质粒的菌在含有四环素的培养基上不能生长,因此,将选择性培养基中的菌落数与非选择性培养基中菌落数进行比较,即可计算出质粒的丢失率。
     
    2.2 培养方法
    斜面、种子和发酵培养:取甘油管菌悬液接种至装有斜面培养基60 ml 的250 ml 茄形瓶,35 ℃培养24 h 后,取1 支茄形瓶斜面,用0.9%无菌生理盐水20 ml 将菌苔洗下,将所制得的菌悬液转接至培养基装液量为15 L 的25 L 种子罐中,调整转速和风量,控制溶氧30%以上,36 ℃培养10 ~12 h。将培养好的种子液1.7 L 转接至培养基装液
    |<< << < 1 2 3 > >> >>|

  • 相关文章:
  • 免责声明:
  • 本新闻内容部分来自互连网,如果该信息侵犯了您的权益,请联系我们,我们会立即作出相应的处理。 在对信息的正确性和准确性进行考证之前,中国饲料添加剂信息网对在网站上刊登之所有信息不声明或保证其内容之正确性或可靠性;您于此接受并承认信赖任何信息所生之风险应自行承担。中国饲料添加剂信息网有权但无此义务,改善或更正所刊登信息任何部分之错误或疏失。
  关于我们 网站简介 站点导航 广告业务 友情链接